PeproTech細(xì)胞因子常見問題解答

PeproTech研制出的無動(dòng)物成分的重組蛋白(animal-free recombinant proteins)，是利用專有的無動(dòng)物成分生產(chǎn)設(shè)施，在嚴(yán)格的無動(dòng)物成分條件下生產(chǎn)出來，因此痕量的動(dòng)物源性污染引發(fā)潛在問題的可能性被降至低，從而*達(dá)到臨床前研究和細(xì)胞治療用標(biāo)準(zhǔn)。PeproTech研發(fā)無動(dòng)物成分的培養(yǎng)基添加物試劑盒(animal-free Media Supplement Kits)。這些試劑盒經(jīng)改良設(shè)計(jì)，其中的無血清組分對(duì)多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)有更好的維持能力。

優(yōu)質(zhì)的RUO細(xì)胞因子

 全長(zhǎng)和*生物活性的RUO細(xì)胞因子是由我們經(jīng)驗(yàn)豐富的蛋白質(zhì)科學(xué)家內(nèi)部開發(fā)的。該過程從我們的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室開始，進(jìn)行基因設(shè)計(jì)和表達(dá)，然后到細(xì)胞銀行，進(jìn)行發(fā)酵/細(xì)胞培養(yǎng)，純化，終進(jìn)行QC測(cè)試。

大腸桿菌（E.coli）表達(dá)蛋白：

PeproTech擁有超過15,000平方英尺的發(fā)酵，蛋白質(zhì)加工和凈化設(shè)備，能夠滿足客戶的需求。

細(xì)胞培養(yǎng)表達(dá)蛋白：

PeproTech擁有*的細(xì)胞培養(yǎng)和蛋白質(zhì)純化設(shè)備，能夠提供糖基化的*生物活性蛋白。

常見問題 - RUO細(xì)胞因子

每個(gè)產(chǎn)品的相關(guān)信息均在該產(chǎn)品隨附的CoA(說明書)中，請(qǐng)仔細(xì)閱讀這些信息，以獲知溶解和存儲(chǔ)的方法。

1. 你們的蛋白產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何？ 

除非在產(chǎn)品說明書中特別注明，我們的所有產(chǎn)品均為凍干粉，在室溫條件下非常穩(wěn)定。盡管如此，我們還是建議您將凍干產(chǎn)品保存在-20oC至-80oC。對(duì)于大多數(shù)產(chǎn)品，重懸后在4oC僅能短期保存。如想長(zhǎng)期保存，請(qǐng)用含載體蛋白(如0.1% BSA)的溶液稀釋已重懸的蛋白，然后分裝、凍存于-20oC至-80oC。分裝濃度要求不低于1 µg/ml，每管體積要求不小于10µl。務(wù)必注意，請(qǐng)避免反復(fù)凍融，因每次凍融均可能引起蛋白的部分變性。因此，我們建議分裝的蛋白溶液凍融不要超過1次。

2. PeproTech重組蛋白的內(nèi)毒素水平如何？

PeproTech大部分無動(dòng)物成分級(jí)別蛋白的內(nèi)毒素水平均保證低于0.01 ng/µg蛋白，即0.1 EU/µg蛋白。對(duì)于大多數(shù)非無動(dòng)物成分級(jí)別的蛋白，內(nèi)毒素水平保證低于0.1 ng/µg蛋白，即1 EU/µg。其實(shí)，許多蛋白的實(shí)際內(nèi)毒素含量均低于上面標(biāo)稱的內(nèi)毒素水平，具體信息請(qǐng)與我們的質(zhì)量保證(QA)部門聯(lián)系。

3. 為什么我在管中看不到蛋白團(tuán)塊？

與市場(chǎng)上的許多蛋白產(chǎn)品不同，PeproTech的產(chǎn)品中不含任何載體蛋白和其它添加物 (如BSA, HSA和蔗糖等)，并且常在含鹽量的溶液中凍干，結(jié)果是微量的蛋白在凍干過程中會(huì)沉積在管壁上，形成蛋白薄膜，有時(shí)肉眼觀察不到。我們建議，在打開管蓋前用小離心機(jī)快速離心20-30秒，使附著在管蓋或管壁上的蛋白團(tuán)塊聚集于管底。盡管可能看不到蛋白團(tuán)塊，但我們的質(zhì)控程序保證每管中的蛋白含量準(zhǔn)確無誤。

4. 哪些細(xì)胞因子有種屬交叉活性？

除少數(shù)例外，大多數(shù)人細(xì)胞因子對(duì)小鼠細(xì)胞均有活性，很多小鼠細(xì)胞因子也可作用于人，但反應(yīng)的特異性可能低于對(duì)應(yīng)的人細(xì)胞因子。IL-7等為數(shù)不多的人細(xì)胞因子作用于小鼠細(xì)胞時(shí)，甚至比對(duì)應(yīng)的小鼠細(xì)胞因子活性還強(qiáng)。干擾素，GM-CSF, IL-3和IL-4等細(xì)胞因子的種屬特異性很強(qiáng)，與其它種屬細(xì)胞的交叉反應(yīng)活性非常弱。相反，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素(neurotrophins)等高度保守，在不同動(dòng)物種屬細(xì)胞上均呈現(xiàn)良好的生物學(xué)活性。

5. ED50和units/mg均用來表示比活性(specific activity)，兩者之間有什么關(guān)聯(lián)？

ED50的定義是可誘導(dǎo)50%大反應(yīng)的細(xì)胞因子濃度，而比活性(specific activity)是單位重量蛋白樣品中所含的活性單位。比活性單位(Specific Activity Units)只能用于表示蛋白的效能，且僅適用于劑量反應(yīng)曲線為S形的蛋白。

6. 比活性單位(specific activity units)和活性的單位(International Units)之間有什么關(guān)聯(lián)？比活性單位和單位(IU)之間沒有直接的關(guān)聯(lián)，不能相互換算。

單位(IU)是與標(biāo)準(zhǔn)品的活性單位(即IU/ng)比對(duì)后得出的活性數(shù)值，后者是在世界衛(wèi)生組織(WHO)領(lǐng)導(dǎo)的合作研究中確定的。WHO標(biāo)準(zhǔn)品由英國(guó)國(guó)家生物制品檢定所(NIBSC)制備和提供。

簡(jiǎn)單地與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)而得出的蛋白活性單位(IU)常會(huì)出現(xiàn)偏差，原因是每個(gè)蛋白廠家所用的活性檢測(cè)方法很難一致，從而導(dǎo)致與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)后得到的單位(IU)值相互間不具可比性。想要實(shí)現(xiàn)真正的可比性，必須建立標(biāo)準(zhǔn)的活性檢測(cè)方法，以保證所得出的蛋白活性單位(IU)值僅與蛋白的質(zhì)量有關(guān)，而與蛋白的來源無關(guān)。

7. PeproTech是怎樣得到蛋白活性的單位(IU)值的？

在可能的情況下，PeproTech通過將自己的產(chǎn)品與對(duì)應(yīng)的WHO標(biāo)準(zhǔn)品在自已的生物活性測(cè)試中進(jìn)行多次平行比對(duì)來得出單位(IU)值。多次對(duì)比可保證我們能夠排除因測(cè)試本身的不穩(wěn)定性(如產(chǎn)品批次，使用方法和測(cè)試方案等的變異性)而導(dǎo)致的異常值的出現(xiàn)。經(jīng)多次比對(duì)得出的結(jié)果可對(duì)我們產(chǎn)品的單位(IU)值進(jìn)行可靠的定量。