細(xì)胞的生長(zhǎng)需要營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，用于維持細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)稱(chēng)為培養(yǎng)基。培養(yǎng)基按其物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基用于大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)以及生理代謝等基本理論的研究工作。液體培養(yǎng)基中加入一定的凝固劑(如瓊脂)或固體培養(yǎng)物(如麩皮、大米等)便成為固體培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基為細(xì)胞的生長(zhǎng)提供了一個(gè)營(yíng)養(yǎng)及通氣的表面，在這樣一個(gè)營(yíng)養(yǎng)表面上生產(chǎn)的細(xì)胞可形成單個(gè)菌落。因此，固體培養(yǎng)基在細(xì)胞的分離、鑒定、計(jì)數(shù)等方面起著相當(dāng)重要的作用。從多細(xì)胞生物中分離所需要細(xì)胞和擴(kuò)增獲得的細(xì)胞以及對(duì)細(xì)胞進(jìn)行體外改造，觀察，必須解決細(xì)胞離體培養(yǎng)問(wèn)題，同微生物細(xì)胞培養(yǎng)的難易相比，比較困難的是來(lái)自多細(xì)胞生物的單細(xì)胞培養(yǎng)，特別是動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)泛指所有體外培養(yǎng)，其含義是指從動(dòng)物活體體內(nèi)取出組織，于模擬體內(nèi)生理環(huán)境等特定的體內(nèi)條件下，進(jìn)行孵育培養(yǎng)，使之生存并生長(zhǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)工作現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、新藥研發(fā)等各個(gè)領(lǐng)域，成為zui重要的基礎(chǔ)科學(xué)之一。
一、細(xì)胞培養(yǎng)器復(fù)蘇
1.把凍存管從液氮中取出來(lái)，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(dòng)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘)，拿出來(lái)噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。
2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來(lái))，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
3.把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來(lái)。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動(dòng)，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。
4.標(biāo)好細(xì)胞種類(lèi)和日期、培養(yǎng)人名字等，放到37℃的5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。
5.根據(jù)細(xì)胞增長(zhǎng)速度2-3天換一次培養(yǎng)基。
二、細(xì)胞培養(yǎng)器傳代
1.培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。
2.把原有培養(yǎng)基吸掉。
3.加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細(xì)胞就行)，消化1-2分鐘。
4.細(xì)胞都變圓后加入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
5.用移液槍吹打細(xì)胞，讓細(xì)胞懸浮起來(lái)。
6.把細(xì)胞吸到10ml或15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
7.倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細(xì)胞都吹起來(lái)。
8.根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。一般，癌細(xì)胞分5個(gè)，正常細(xì)胞傳3個(gè)。繼續(xù)培養(yǎng)。
三、細(xì)胞培養(yǎng)器凍存
把細(xì)胞消化下來(lái)并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來(lái)，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫(xiě)明細(xì)胞種類(lèi)，凍存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃夜，然后放到液氮灌中保存。
凍存液的配制：70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。
