人淋巴細胞CIK（Cytokine-InducedKiller）治療的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)流程主要分為幾個步驟，具體包括淋巴細胞的分離、培養(yǎng)、激活及擴增。以下是一個常見的培養(yǎng)流程：
1.樣本收集與淋巴細胞分離
采集外周血：使用抗凝劑（如肝素）從患者或供體采集外周血。
分離外周血單核細胞（PBMC）：使用密度梯度離心（如Ficoll-Paque）分離出外周血單核細胞（PBMC）。
2.細胞激活
培養(yǎng)基選擇：常用的培養(yǎng)基為RPMI-1640或IMDM培養(yǎng)基，加入10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/鏈霉素。
細胞激活劑：添加刺激淋巴細胞增殖的細胞因子，常見的細胞因子包括：
IL-2（白介素-2）：激活T細胞的增殖和擴增。
IFN-γ（干擾素-γ）：促進細胞毒性作用。
抗CD3抗體（如OKT3）或者其他T細胞受體激活劑。
抗CD28抗體：增強T細胞的激活反應。
激活過程通常在37°C、5%CO?的條件下進行，培養(yǎng)時間為2-3天。
3.擴增培養(yǎng)
在激活后細胞需要繼續(xù)擴增，通常會在培養(yǎng)基中添加更多的IL-2，以維持細胞的增殖。細胞數(shù)量一般會在3-5天內顯著增加。
為了維持細胞活性和增殖，定期更換培養(yǎng)基（大約每兩天一次），并補充IL-2。
4.細胞收獲
細胞檢測：使用流式細胞術檢測CIK細胞的純度和細胞毒性。
細胞培養(yǎng)結束后，通過離心收集細胞，進行后續(xù)的應用或治療。此時CIK細胞通常已具有較強的細胞毒性活性。
5.質量控制
細胞鑒定：通過流式細胞術或PCR鑒定細胞的標志物，例如CD3、CD56、CD8等。
細胞功能測試：檢測CIK細胞的細胞毒性活性，包括對腫瘤細胞的殺傷效果。
6.凍存（可選）
如果需要長期保存，可以將CIK細胞進行凍存。使用適當?shù)膬龃嬉海ㄈ绾蠨MSO的凍存液）進行低溫保存。
培養(yǎng)基配方（常見示例）：
RPMI-1640培養(yǎng)基
10%FBS
1%青霉素/鏈霉素
10ng/mlIL-2（用于增殖和激活）
50ng/mlIFN-γ
抗CD3抗體（可選）
注意事項：
培養(yǎng)環(huán)境：保持37°C，5%CO?環(huán)境，確保細胞生長良好。
細胞因子的添加：根據需要可以調整IL-2和IFN-γ的濃度，以優(yōu)化細胞增殖和功能。
此流程為基礎的CIK細胞培養(yǎng)流程，具體的實驗細節(jié)可以根據不同的實驗要求進行調整。
