造血干細胞培養(yǎng)基配制

    人造血干細胞作為成體干細胞的重要組成，尤其在胚胎干細胞定向誘導分化為造血干細胞的機理、CD34和CD45等表面標志分子成功篩選、培養(yǎng)條件的優(yōu)化探索中取得了突破性進展，這為治療惡性血液疾病、根本緩解血細胞來源緊張等臨床應用提供了可能。本文就人類胚胎干細胞向造血干細胞方向分化的研究進展作如下綜述，以期為致力于該研究領域工作的科研人員提供一些有益的參考。
    人體大部分骨頭的中央部門有骨腔,骨腔內所含的物質即骨髓.骨髓中有一種能起著造血功能的細胞就叫造血干細胞.人血中的紅細胞,血小板,淋巴細胞,粒細胞等,都是由它經(jīng)過多次分化發(fā)育而成的.
    造血干細胞( hematopoietic stem cell，HSC) 具有高度的自我更新和多向分化潛能，是組織特異性干細胞研究中zui為活躍和成熟的研究方向，也是組織特異性干細胞轉分化研究的發(fā)源地和核心，已經(jīng)成為目前研究zui為深入的成體干細胞，在世界范圍內得到了廣泛應用。
    造血干細胞培養(yǎng)基配制
    一、配制用水
    培養(yǎng)基的大部分是水，所以水的質量直接影響培養(yǎng)基的質量。按Waymouth標準，水的電阻應為200萬歐姆，一般實驗室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。
    二、培養(yǎng)基
    培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調pH至7.2-7.4，若pH值超過7.6或遠低于6.8，則大多數(shù)細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。
    三、血清
    培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體，置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養(yǎng)細胞種類、時間而定，一般用10—15%。由于血清成分復雜、條件不易控制，可選用無血清培養(yǎng)基。
    四、抗菌素
    為防止培養(yǎng)時期細菌的污染，可在培養(yǎng)基中添加適當抗菌素，一般用量與組織細胞培養(yǎng)相同：卡那霉素100單位/毫升，或雙抗--青霉素100單位/毫升，鏈霉素100微克/毫升。
    五、植物血凝素（PHA）
    非增殖期的細胞不能制備染色體，如人外周血淋巴細胞，但在離體培養(yǎng)過程中，在PHA的作用下，可被刺激轉化為淋巴母細胞而進入有絲分裂。
    經(jīng)實驗測定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44-48小時和68-72小時。
    PHA有粘多糖，蛋白質兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂，蛋白質起凝集作用。PHA激活的細胞數(shù)隨其濃度而增加，直至全部免疫活性細胞均被激活為止，但PHA濃度過高會引起凝集，一般采用4%濃度為好。