Cygnus F410 E.coli HCP ELISA Kit 大腸桿菌宿主細胞蛋白免疫檢測試劑盒

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產品英文名稱：E.coli HCP ELISA Kit
產品中文名稱：大腸桿菌宿主細胞ELISA檢測試劑盒

E.coli HCP ELISA試劑盒 產品介紹：
E.coli HCP試劑盒主要設計用于檢測產物重組表達過程中大腸桿菌宿主細胞污染，試劑盒使用的多克隆抗體對數百種HCPs具有反應性。檢測zui低濃度可達到 0.2ng/mL。
ELISA檢測相比Western Blot：Western Blots檢測過程復雜并需借助程序分析結果。而且，Western Blot本質上是定性分析，不能得到定量結果，檢測靈敏性也受到樣本體積的限制。Western Blot在下游純化過程中檢測產物HCPs缺乏靈敏度和特異性。而微量滴定板ELISA檢測可以克服上述限制。ELISA具備高度靈敏性，可獲得半定量結果，是純化工藝，過程控制，常規質量檢測的*選擇。

§檢測原理：大腸桿菌E. coli檢測是一個雙位點酶聯免疫檢測。樣本中包含的E. coli HCPs蛋白與標記有抗-CHO抗體的辣根過氧化物酶同時反應，反應發生在之前涂有一層吸附性抗-CHO蛋白抗體的微量滴定板中進行。免疫反構成為夾層式結構：固相抗休-HCP-酶標記抗體。反應結束后清洗微量滴定板去除未結合反應物。添加TMB作用底物反應。微量滴定板讀數器上測定水解物濃度，水解物濃度與CHO HCPs蛋白濃度成比例。用提供的標準液繪制標準曲線，根據讀數可以計算出E. coli HCPs蛋白含量。

§檢測過程：取出所有試劑平衡到室溫→分別移取25µl標準液，對照物和樣品至待測孔→移取100µl anti-E. coli:HRP（#F411）至每孔→密封滴定板，搖床室溫溫育90分鐘，180rpm→清空小孔，用紙吸干殘留液，350µl清洗緩沖液清洗4次→加100µl TMB 作用物（#F005）→室溫靜置30分鐘，不需搖床→加100µl反應終止液（#F006）→分光光度計450/650nm讀數

§結果分析：標準液（0, 1, 3, 12, 40, 100ng/mL）可用于制作標準曲線，標準液濃度相當于免疫反應HCP總濃度。根據測定的小孔中標準液吸光值繪制標準曲線。數據分析可以使用計算機選配曲線，例如點到點，三次樣本函數，或四參數邏輯曲線。不要使用線性回歸分析修改樣品吸光值，這樣會出現顯著誤差。也可以手工繪圖，Y軸標注吸光值，X軸標注濃度，然后用光滑曲線連接各點。然后根據樣品吸光值計算出樣品中HCP濃度。（操作時每一濃度標準液都要滴定到兩個小孔中，以便計算平均分光光度值，樣品也需計算平均吸光值）。 

CHO HCP ELISA組成成份：
● Anti- E. coli:HRP（辣根過氧化物酶標記）            1x12mL   F411（Product#）
● Anti- E. coli coated微量滴定板                        12x8孔  F412
● E. coli HCP標準液（0, 1, 3, 12, 40, 100ng/mL）     1mL/瓶 F413
● Stop Solution終止液（0.5M硫磺酸）             1x12mL F006
● TMB （3,3’,5,5’-四甲基聯苯氨）                          1x12mL F005
● Wash Concentrate清洗物（20倍濃縮）                1x50mL   F004 

E.coli HCP ELISA kit英文簡述：
This kit was developed using broadly reactive polyclonal antibodies to the hundreds of different HCPs and is intended for use in determining the presence of E.coli host cell protein contamination in products manufactured by recombinant expression. Our assay validation has determined that the LOD for this kit is ~0.2ng/mL.

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